實(shí)驗(yàn)材料

無菌物品

1、Eagle's 1 X MEM:用含HCO3 的Hank's液配制 100ml各種規(guī)格的、加棉塞的、放入方形吸管筒中的玻璃吸管 1ml、5ml、10ml、25ml或單獨(dú)包裝的塑料吸管

2、培養(yǎng)瓶(若用于實(shí)驗(yàn)操作1,需預(yù)先稱) 25cm2

非無菌的物品

移液器或吸耳球；70%乙醉噴霧瓶；不起毛的棉簽;吸水性好的紙巾;裝有水和消毒劑的吸管筒、剪刀、抗乙醇的記號(hào)筆、筆記本、鋼筆、實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)等.

操作步驟

1.用棉簽或紙巾隨蘸 70% 乙醉擦拭工作面和潔凈臺(tái)內(nèi)面.包括前屏板的內(nèi)面.

2.從冷藏室、水摘或冷凍箱內(nèi)取出培養(yǎng)基等.解凍.用70%乙醉擦洗瓶子,并把馬上要用到的物品放到潔凈臺(tái)內(nèi).

3.挑選吸管,放到工作面一側(cè)易于幸到的位置(圖6.2).
(a)如果是玻瑞吸竹,打開吸管盒,把蓋子放在其上或一邊,開n向下;
(b)如果是塑料吸管,除去外包裝,按規(guī)格、型號(hào)分類,把包襄著的吸竹擺放在架子上或盒子中.

4.選出你需要的其他玻璃器皿、嫂料制品儀器設(shè)備等.把它們放在近旁的手推車或工作臺(tái)上

5.松開(但不移走)所有待用的瓶子的蓋子.

6.去掉待移液的試荊瓶或培養(yǎng)瓶的蓋子,口朝上放到潔凈臺(tái)單邊、試劑瓶后面的}

工作臺(tái)上,以保證手不會(huì)從其上方通過.如果某一時(shí)問僅打開一個(gè)瓶蓋,可以把蓋子夾在小指和手掌構(gòu)成的彎中(圖6.6),待移液完成后,把它重新蓋回到原瓶子上.

7.選擇吸管.
（a）如果是玻璃吸管,從盒中取出吸管時(shí).要保持待取吸管在盒中與其他吸管平行,并盡叮能少地接觸他們,特別是吸管頭部,如果拿著的吸管接觸了其他仍在盒內(nèi)的吸管尾端.則不能再使用它;把吸管插人移液器中,吸竹指向你的外側(cè),握在刻度上面部分,這樣,吸管進(jìn)人試劑瓶或培養(yǎng)瓶的部分將不會(huì)被污染(圖6.9).

(b)如果是塑料吸管,打開包裝的上部,向外折,然后往下剝.將近剝到下方時(shí),將吸竹端部插人吸耳球或移液器中,從包裝紙中取出吸管,不要使吸管接觸包裝的外面部分或非無菌工作面,**后,將包裝紙丟進(jìn)廢物筐中.

安全提示：將吸管擂入吸耳球或移液器時(shí),不要太用勁,知果用力太大.吸告會(huì)破裂(圖7.1.7.5.3節(jié)).

8.把吸管插在吸耳球或移液器上時(shí),要使吸管保持合適的角度.并一直要注愈吸管的位置,不讓吸管**接觸試劑瓶外面或沾凈臺(tái)的內(nèi)表面(圖6.9中劃圈區(qū)域).如果是初學(xué)尤菌技術(shù)者.做到這一點(diǎn)并不容易,但它是成功的必要條件,并可在實(shí)踐中取得經(jīng)驗(yàn)9.使試劑瓶向吸管傾斜,以便操作者的手不會(huì)移到瓶子的敞口上方.如果用一容址為sm】的吸竹吸取sm!培養(yǎng)液并轉(zhuǎn)移到25cm2的培養(yǎng)瓶中時(shí),培養(yǎng)瓶也同樣要傾斜.

10.重復(fù)上步操作,并向另外4個(gè)培養(yǎng)瓶移液.如果要把液體移到數(shù)個(gè)瓶子中,可把這些培養(yǎng)瓶立著放置.一定要把它們放在沽凈臺(tái)的較內(nèi)側(cè)區(qū)城,而且不能使手在瓶子開n的上方移動(dòng)(若用于練習(xí)1,要記錄下來向5個(gè)培養(yǎng)瓶移液持續(xù)的時(shí)間).

11.把用過的吸管棄人裝有消毒劑的吸管筒中.如果是塑料吸管.則丟進(jìn)雙倍加厚的可高溫滅菌的生物危害袋中.

12.重新把培養(yǎng)瓶的蓋子蓋好.

13. 重復(fù)以上操作,用25ml的吸管分別向 5 個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移 5ml 溶液.

14.重新把試刑瓶或培養(yǎng)瓶的蓋子蓋好.

15.實(shí)驗(yàn)完畢后,擰緊所有瓶子的蓋子,井從工作面上移走所有不需要的溶液和實(shí)驗(yàn)材料.

16.如果要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的操作,則需稱**培養(yǎng)瓶,檢查所分裝培養(yǎng)基的精確性,并于37℃放置 1 周,以檢查可能的污染.

注意事項(xiàng)

對在垂直式潔凈臺(tái)中操作來說，不要立即在開口器皿的上方操作.

對在水平式沽凈臺(tái)中操作來說,，不要在開口器皿的后方操作.